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EnglishTumor pretargeting with biotinylated antibody/avidin complexes improves the therapeutic index of systemically administered biotin-tumor necrosis factor (TNF) conjugates. Since the number of biotins in this conjugate is known to be critical for activity, we have characterized the structure of different biotin-TNF conjugates, prepared by reaction with d-biotinyl-6-aminocaproic acid N-hydroxysuccinimide ester and identified the biotinylation sites by trypsin digestion, reverse-phase chromatography, and electrospray mass spectrometry analyses. The results have shown that N-terminal valine is a preferential biotinylation site at pH 5.8, half of biotins being located on the alpha-amino group of this residue in a conjugate bearing one biotin/trimer (on average). Moreover, evidence has been obtained to suggest that the remaining part of biotins are linked to the epsilon-amino group of lysine 128, 112, and 65, while lysine 11, 90, and 98 were practically unmodified. No evidence of O-biotinylation of serine, threonine and tyrosine was obtained.
| Citazione: | Magni, F., Curnis, F., Marazzini, L., Colombo, R., Sacchi, A., Corti, A., et al. (2001). Biotinylation sites of tumor necrosis factor-alpha determined by liquid chromatography-mass spectrometry. ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, 298(2), 181-188. |
| Tipo: | Articolo in rivista - Articolo scientifico |
| Carattere della pubblicazione: | Scientifica |
| Presenza di un coautore afferente ad Istituzioni straniere: | No |
| Titolo: | Biotinylation sites of tumor necrosis factor-alpha determined by liquid chromatography-mass spectrometry |
| Autori: | Magni, F; Curnis, F; Marazzini, L; Colombo, R; Sacchi, A; Corti, A; Kienle, M |
| Autori: | |
| Data di pubblicazione: | 2001 |
| Lingua: | English |
| Rivista: | ANALYTICAL BIOCHEMISTRY |
| Digital Object Identifier (DOI): | 10.1006/abio.2001.5374 |
| Appare nelle tipologie: | 01 - Articolo su rivista |
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