MULTICENTRE AND MULTISPECIES PRECLINICAL TRIAL OF REMOTE ISCHEMIC CONDITIONING IN ANIMAL MODEL OF ACUTE ISCHEMIC STROKE (TRICS–BASIC)

Remote ischemic conditioning (RIC) represents an ideal candidate to enter a multicenter trial for acute ischemic stroke (AIS) treatment, since previous results from single laboratories support its efficacy, but unfortunately phase II–III clinical trials still provided inconclusive results. TRICS–Basic is the preclinical trial in the TRICS project, a multicentre translational Trial of Remote Ischemic Conditioning in Acute Ischemic Stroke from the Italian Stroke Organization (ISO) Basic Science network, which consisted in the collaboration of 7 Italian institution. TRICS–Basic is a robust, translationally oriented, multicentre, randomized preclinical trial, which includes two animal species (rats and mice) and both male and female sexes are equally represented. The aim of this project was to investigate the efficacy of RIC treatment in AIS experimental models. All the animals in the MCAo+ groups were subjected to the same time of occlusion (60 min in mice; 100 min in rats). The treatment was applied by clamping the ipsilateral femoral artery for 10 min in mice and 20 min in rats. Blinded outcomes assessment was performed both for dichotomized functional neuroscore (primary outcome) and for infarct volume (secondary outcome) at 48 hours. Statistical analyses were performed in a blind status and according to an intention–to–treat paradigm. During the initial experimental period, we carried out a harmonization phase, including all the involved centres, in order to reduce the assessment bias during the neurobehavioral test evaluation. After we have reached the target of Inter class correlation (ICC) 30.60 imposed a priori by the protocol paper, we started the real experimental phase. The experimental cohort was composed by n=206 animals (n=110 mice and n=96 rats) but only n=168 were allocated in the MCAo+ groups (n=88 mice; n=80 rats) and n=152 animals were included in the study (n=78 mice; n=74 rats). The obtained data showed that RIC improve the good functional outcome (+20% in mice; +18% in rats) and reduce the area of ischemic injury (-4.3% in mice; -26.6% in rats) in both species. Despite the large number of animals used in this study and as compared to previous preclinical studies on RIC treatment, we did not reach the statistical significance in our two major outcomes, if we compare the single species alone. On the contrary, if we combine together all the animals, we obtained a significant result in both the analysed outcomes. This suggest that, similarly to clinical trials, a larger sample size would have resulted in more significant results in the functional and the infarct size outcomes single species analyses.

Il condizionamento ischemico remoto (RIC) risulta essere un candidato ideale per essere investigato in uno studio multicentrico volto al trattamento dell'ictus ischemico acuto (AIS). L’ efficacia terapeutica del RIC è stata dimostrata a livello preclinico, come riportato da precedenti studi ottenuti da singoli laboratori; ciò nonostante, gli studi clinici di fase II-III non hanno ancora fornito risultati soddisfacenti. TRICS Basic è definita come la fase preclinica del progetto TRICS, un Trial traslazionale multicentrico di Condizionamento Ischemico Remoto in modelli animali di Ictus Ischemico Acuto, sostenuto dell’Organizzazione Italiana sull’ictus (ISO), che ha previsto la collaborazione di 7 università e centri di ricerca italiani. TRICS Basic è uno studio preclinico multicentrico, randomizzato e consistente, oltre ad essere orientato alla pratica traslazionale. Lo studio include due specie animali (ratti e topi) ed entrambi i generi (maschi e femmine) sono ugualmente rappresentati. Lo scopo di questo progetto è quello di studiare l'efficacia del trattamento RIC in modelli preclinici di ictus ischemico acuto. Tutti gli animali allocati nel gruppo MCAo+ (soggetti ad ictus) sono stati sottoposti allo stesso tempo di occlusione (60min nei topi; 100min nei ratti). In particolare, il trattamento è stato applicato bloccando l'arteria femorale ipsilaterale per 10 minuti nei topi e 20 nei ratti. La valutazione dei risultati è stata eseguita in cieco, sia per quanto riguarda l’outcome funzionale dicotomizzato (risultato primario), che per la quantificazione del volume dell'infarto (risultato secondario) a 48 ore. Anche le analisi statistiche sono state eseguite in cieco e secondo un paradigma intention–to–treat. Durante la fase sperimentale iniziale, è stata effettuata una fase di armonizzazione, includendo tutti i centri coinvolti, al fine di ridurre le differenze di valutazione durante la valutazione neurocomportamentale. Dopo aver raggiunto l'obiettivo di interclass correlation (ICC)=0.60, imposto a priori dal protocollo pre–pubblicato, la vera fase sperimentale ha avuto inizio. La coorte sperimentale è composta da n=206 animali (n=110 topi e n=96 ratti) ma solo n=152 sono stati inclusi nell’analisi finale per il gruppo MCAo+ (n=81 topi; n=71 ratti). I risultati ottenuti hanno dimostrato che il RIC ha un effetto positivo a livello dell’outcome funzionale (+20% nei topi; +18% nei ratti) ed è in grado di ridurre l'area della lesione ischemica (-4,3% nei topi; -26,6% nei ratti) in entrambe le specie analizzate. Nonostante il consistente numero di animali utilizzati in questo studio, rispetto ai precedenti studi preclinici su questo trattamento, non abbiamo raggiunto la significatività statistica nei nostri due outcome principali, se confrontiamo le singole specie animali. Al contrario, analizzando tutti gli animali come un’unica specie, abbiamo ottenuto un risultato significativo in entrambi gli outcome. Ciò suggerisce che, analogamente agli studi clinici, una maggiore dimensione della popolazione avrebbe portato a risultati più significativi per quanto riguarda il miglioramento del deficit neurologico e la riduzione del volume dell’infarto, analizzando le singole specie.